應用Sulfa dimethoxin，Trimethoprim配合劑TA-068W於雞傳染性鼻炎

摘 要

以Sulfadimethoxin及Trimethoprim配合之水溶劑TA-068W，應用於雞傳染性鼻炎，得如下成績。

以0.1％，0.3％及0.5％濃度之TA-068W，飲水投與5日時，可使顏面腫脹、鼻汁排泄，異常呼吸者等之傳染性鼻炎特有之症狀，幾乎消失。投與終了時及終了7日後之生存率及平均體重，無處置對照群為88.9％，86.4％，1.09 kg。0.95 kg，而TA-068W 0.3％及0.5％投與群則為97.5∼100％，1.37∼1.52 kg，在TA-068W投與群，自投與終了時及終了7日後之供試雞，不能分離出Haemophilvs paragallinarum (HPg)

，但自對照群可分離出30％。自供試雞群之部份，有對HPg A型之Hl抗體，抗體價為1：10∼1：20。自TA-068W之供試雞分離之12株HPg，最小發育阻止濃度全為0.39μg／ml。

前 言

HPg為起因菌之雞傳染性鼻炎(IC)，因單獨感染之死亡率低，所以較易被忽視，但在幼、中雛，會引起發育遲延，在大雛會引起遲延產卵開始時期，在成雞會引起產卵降低、停止等，不能忽視給予養雞產業之經濟性損失。

在日本，自加藤初次分離、同定HPg以來，先人已開發出本症之很多預防、治療藥及疫苗，但由於藥劑耐性化或不同血清型之HPg的出現等，可以設其效果不充分。因此，著者酒井等，檢討至今之IC的預防，治療對策，本次就對診斷為IC之野外發生群，應用Sulfadimethoxin，Trimethoprim配合之水溶散劑TA-068W，得良好成績，茲報告如下：

一、材料及方法

1.供試藥劑

供試之TA-068W為1g中，含有Sulfadimethoxin(SDM) 45mg及Trimethoprim(TMP) 5mg之白色粉未狀製劑，對照藥劑為使用1g中含有鹽酸Oxytetracycline (OTC) 110mg (力價)之製劑(以下略稱OTC製劑)。

2.供試雞及飼育狀況

供試雞為在靜岡縣富士宮市─養雞場，所飼育中之120日齡(1985年11月18日開始給餌)之Geto 360系之大雛，利用高床式金屬網製雞籠，在野外行群飼。僅在生後14日齡及28日齡，行新城雞瘟病生疫苗之接種。

試驗期間中之給與飼料為伊藤忠飼料，其配合組成為，粗蛋白質14.0％以上，粗脂肪2.5％以上，粗纖維6.0％以下，粗灰分9..0％以下，鈣0.8％以上，磷0.55％以上。

自1986年3月10日起，發現此雞群之3成左右，有顏面腫脹、鼻汁排泄、異常呼吸音等典型之IC症狀，因分離出HPg，判斷為IC之野外發症例，而供作本劑之治療效果判定試驗。

3.試驗區分及投與期間

自742隻供試雞群，去除為檢查投與開始以前任選之20隻外，其餘之722隻，分成5群，設TA-068W 0.1％投與群(以下略稱0.1％投與群，104隻)，0.3％投與群(158隻)，0.5％投與群(157隻)，OTC製劑500 mg(力價)／l投與群(以下略稱OTC投與群，105隻)及無處置對照群(198隻)各藥劑之投與期間為5日，此後觀察7日。

又，自1986年3月18日至3月30日實施。

4.檢查項目

(1)生存率

調查投與開始時(3月18日)，5日投與終了時(3月23日)及投與終了7日後(3月30日)，各投與群之供試雞的全生存隻數，求出生存率。

又，在投與終了7日後之生存隻數，為含括投與終了時之屠殺檢查隻數(各區10隻)，求出生存率。

(2)臨床症狀及體重測定

投與開始時，自742隻供試雞任選20隻，又在投與終了時及投與終了7日後，自任一群各任選10隻，計100隻，調查其症狀，測定體重，此後屠殺、剖檢，供作HPg之分離及血清採取。

(3)HPg之分離同定

利用添加10％馬血液，5％雞非慟化血清及1％BBL (Isobitalen)於Tryptosoy瓊脂(徤研)，製成之巧克力瓊脂，作分離培養基。先以滅菌綿棒拭擦眼窩下洞及氣管黏膜，塗抹於分離培養基，在37℃，5％ CO2下，培養48小時。

觀察培養基上發生之集落，疑為HPg之集落，行純培養。遵照Bergey氏分類細菌學手冊Vol. 1 (1984)同定，其菌株之性狀有顯示，Gram染色(－)，Catalase(－)，溶血性(－)，n因子要求性(－)，V因子要求性(＋)，CO2要求性(－)，Indol產生(－)，硝酸鹽還原(＋)，尿素鋛(－)，葡萄糖(＋)，42℃發育(－)者，同定為HPg。

(4)對HPg之HI抗體價的測定

HPg抗原製作用菌株，A型為利用221株，C型為利用Modesto株。此兩菌株使用前述之分離培養基，在5％ CO2下，37℃培養48小時，集菌於M／15 PBS。

此後，221株以M／15 PBS洗淨3次，依照Yamagu chi之方法，調整濃度使10倍稀釋菌液成OD 0.4 (540 nm)，加0.01％之tynerosal(武田藥品)於此稀釋菌液，作為抗原液。另，Modesto株為依照Sawata之方法，以KSCN處理菌液後，離心去除上清液，在4℃靜置2小時，調整濃度使10倍稀釋菌液，成為OD 0.4 (540 nm)，次以超音波處理後，加0.01％ tymerosal，作為抗原液。

檢查雞血清為依照Sawata之方法，吸收非特異凝集素後，測定HI抗體價，又利用新鮮雞血球，測定A型HI抗體價，依照Bing之方法，利用固定化雞血球，測定C型HI抗體價。

(5)對其他呼吸器病之抗體檢查

被檢血清除測定HPg之HI抗體價外，各別利用市售之抗原，以急速平板凝集反應，測定Mycoplasma gallisepticum (MG)及Mycoplasma synoviae (MS)抗體，以HI反應測定新城雞瘟病病毒(NDV)抗體。依ELISA測定傳染性F氏囊病病毒(IBDV)抗體，又利用M41株，依瓊脂膠內沉降反應，檢查傳染性氣管支炎病毒(IBV)，利用NS-175株，依同上反應，檢查傳染性喉頭氣管炎病毒(ILIV)。

(6)分離之HPg的藥劑感受性

對分離之18株HPg中之12株，遵照日本化學療法學會法，調查劑記藥劑之最小發育阻止濃度(MIC)，在前培養是利用添加1％ Isovitalen之感受性測定用肉汁(口水)，在感受性測定係使用添加10％馬血液及1％ Isovitalen之感性圓盤(disk)用培養基－N (口水)，製作之巧克力瓊脂，在5％ CO2下，培養48小時。

又供試藥劑為，TA-068W有效成分之SDM及TMP，以及P：1配合比之SDM／TMP (同於TA-068W之配合比)，對照藥劑為OTC。

二、成 績

1.生存率

投與5日終了時之生存率，在0.3％投與群為99.4％，在0.5％投與群為100％，顯著較高於無處置對照群之88.9％ (P＜0.01，x 2檢查)，另在0.1％投與群及OTC投與群之投與終了時之生存率，各別為91.3％，94.3％，有較高於無處置對照群之傾向，但沒有顯著差異(表1)。

表一 飲水投與TA-068W，雞傳染性鼻炎罹患雞之生存隻數及生存率

試 驗 群

TA - 068 W

OTC(力價) 500 mg／l

無處理對 照

合 計

0.1％

0.3％

0.5％

投與開始時(3／18)

屠殺檢查隻數

───────20────────────

20

藥劑投與隻數(A)

投與終了時(3／23)

生存隻數

生存率(B／A×100)％

屠殺檢查隻數

投與終了7日後(3／30)

生存隻數

生存率(C／A×100)％

屠殺檢查隻數

104

95

91.3

10

83＋10a

89.4

10

158

157

99.4*

10

144＋10a

97.5*

10

157

157

100*

10

145＋10a

98.7

10

105

99

94.3

10

85＋10a

90.5

10

198

176

88.9

10

161＋10a

86.4

10

722

684

─

50

618＋50a

─

50

*：P＜0.01 (x2 檢定)。

a：投與終了時屠殺檢查隻數，作生存隻數處理，求出投與終了7日後之生存率。

2.臨床病狀

投與開始時之20隻檢查雞中有5隻，可見顏面腫脹，鼻汁排泄及異常呼吸音等主症狀之IC特有的症狀。投與終了時，在TA-068W各投與群及OTC投與群，呈這些症狀之雞有減少，尤其在0.3％及0.5％投與群，10隻中只有1隻見此症狀，在無處置對照群，投與終了時及終了7日後，均於10隻中有4隻，可見此症狀。

3.試驗期間中之體重變化

投與開始時之平均體重為1.15 kg，在無處置對照群，投與終了時為1.09 kg，終了7日後為0.95 kg，有逐漸減少傾向，但在各投與群，試驗期間中卻有增加之傾向，但在TA-068W各投與群，體重之增加與添加濃度比例變大，即在0.5％投與群，投與終了時為1.41 kg，終了7日後為1.52 kg，最大，其次是0.3％投與群之1.23 kg，1.41 kg，再次是OTC投與群之1.23 kg，1.41 kg之順序。體重增加最小的是0.1％投與群之1.16 kg，1.27 kg，投與終了時之0.1％投與群及OTC投與群除外，任一群之平均體重，均顯著較高於無處置對照群(P＜0.01或＜0.001) (表2)。

表二 飲 水 投 與 TA-068W ， 雞 傳 染 性 鼻 炎 罹 患 雞 之 平 均 體 重 推 移

試 驗 群

TA - 0.68 W

OTC (力價) 500 mg／l

無處置對照

0.1 ％

0.3 ％

0.5 ％

投與開始時，kg

1.15±0.04 (20)

投與終了時，kg

投與終了7日後，kg

1.16±0.05(10)

1.27±0.07(10)

1.37±0.05(10)**

1.48±0.10(10)**

1.41±0.07(10)**

1.52±0.04(10)**

1.23±0.03(10)

1.41±0.07(10)**

1.09±0.05(10)

0.95±0.08(10)

平均值±標準誤差。

( )為測定體重隻數。

* P＜0.01 **P＜0.001 ( t 檢定 )。

4.剖檢所見

投與開始時所檢查，屠殺之20隻中有4隻，在鼻腔及眼窩下洞內，可見伴有水漾乃至灰白色之黏液分泌之鼻炎或洞炎，有6隻可見伴有混濁肥厚及乾酪樣物附著之氣囊炎，但各投與群在投與終了時及投與終了7日後，任一群之10隻中，僅有2隻可見這些所見，在無處置對照群，投與終了時及終了7日後之任一群，10隻中卻有5隻，可見異常。

5.HPg之分離狀況

投與開始時之屠殺檢查雞，20隻中有2隻，自眼窩下洞，可分離出PHg，在TA-068W投與群，投與終了時及投與終了7日後，均檢不出HPg。在OTC投與群，投與終了時之屠殺檢查雞，10隻中有1隻，自眼窩下洞及氣管，分離出HPg。另在無處置對照群，投與終了時及終了7日後，10隻中之3隻，自眼窩下洞可分離出HPg(表3)。

6.對HPg之HI抗體保有狀況

對HPg A型之HI抗體，見於投與開始時之20隻檢查雞之2隻，又各群均投與終了時，10隻中可見1隻，在投與終了7日後，10隻中可見2∼6隻，但對HPg C型之HI抗體保有雞，投與開始時，投與終了時及終了7日後，120隻屠殺檢查雞之任1隻，均沒有發現。

表三 飲水投與TA-068，自雞傳染性鼻炎罹患雞分離H. paragallinarum

試 驗 群

TA – 068 W

OTC (力價) 500 mg／l

無處置對 照

採 樣 日

檢查隻數

採樣部位

0.1％

0.3％

0.5％

投與開始時

20

眼窩下洞

氣 管

2 *／20

0／20

投與終了時

各10

眼窩下洞

氣 管

0

0

0

0

0

0

1 **

1 **

3

0

投與終了7日後

各10

眼窩下洞

氣 管

0

0

0

0

0

0

0

0

3

0

*：HPg之分離隻數

**：自同一檢查雞分離

又，HI抗體價之G.M.，在投與終了時，各投與群與無處置對照群之間，沒有發現差異，在投與終了7日後，各投與群有6.2∼8.7，較高於無處置對照群之5.4(表4)。

表四 飲水投與TA-068W，雞傳染性鼻炎罹患雞之H. paragallinarum之Hl抗體價

採 樣 日

檢查隻數

HI抗體價

TA – 068 W

OTC(力價) 500 mg／l

無處置

對 照

0.1％

0.3％

0.5％

投與開始時

20

A型 ＜10

10

C型 ＜10

──────────18*──────────

────────── 2 (5.4)───────

──────────20 ──────────

投與終了時

10

A型 ＜10

10

20

C型 ＜10

9

─

1

10

(5.7)

9

1

─

10

(5.4)

9

1

─

10

(5.4)

9

─

1

10

(5.7)

9

1

─

10

(5.4)

投與終了7日後

10

A型 ＜10

10

20

C型 ＜10

8

1

1

10

(6.2)

6

4

─

10

(6.6)

7

3

─

10

(6.2)

4

4

2

10

(8.7)

9

1

─

10

(5.4)

*：隻數

( )：表示G.M. ＜10為當作5求出

7.對各種呼吸器病之抗體檢查

就投與開始時，投與終了時及終了7日後，共120隻屠殺剖檢之檢查雞，調查對6種呼吸器病，有無血清抗體，MG及MS抗體為全例陽性，ILTV抗體為全例陰性，IBV抗體為96％陰性，NDV之HI抗體及IBDV之ELISA抗體，為全例陽性。亦即，NDV之HI抗體價(G.M.)，在投與開始時為100.4，投與終了時，0.1％投與群為111.4，0.3％投與群為73.5，0.5％投與群為64.0，OTC投與群為256，無處置對照群為119.4，在終了7日後，同樣有157.6，90.5，294.1，337.8，111.4。

又，IBDV之ELISA抗體價(G.M.)，在投與開始時為197.5×103，在投與終了時，0.1％投與群為454.7×103，0.3％投與群為209.2×103，0.5％投與群為177.9×103，OTC投與群為168.6×103，無處置對照群為202.2×103，在終了7日後，同樣有287.0×103，219.6×103，263.3×103，249.3×103，389.5×103。

8.分離之HPg的藥劑感受性

對自檢查雞分離出之12株HPg，SDM，TMP及同TA-068W配合比之SDM／TMP及OTC之MIC，各別為25∼50，0.05∼0.10，0.39及1.56 mg／ml (表5)。

表五 自傳染性鼻炎罹患雞之眼窩下洞分離之H. paragallinarum之藥劑感受性

採樣

日

檢查雞No

 試驗群由來

菌株No

MIC (μg／ml)

SDM／TMP*

TMP

SDM

OTC

投與

開

始 時

202

220

─

─

12

39

36

37

0.39

0.39

0.39

0.39

0.05

0.05

0.10

0.10

25

50

50

50

1.56

1.56

1.56

1.56

投與

終

了

後

303

342

343

345

OTC

500mg(力價)／l

無處置對照

無處置對照

無處置對照

104

105

89

90

92

93

95

96

0.39

0.39

0.39

0.39

0.39

0.39

0.39

0.39

0.10

0.05

0.05

0.05

0.10

0.10

0.05

0.05

50

50

50

50

50

50

50

50

1.56

1.56

1.56

1.56

1.56

1.56

1.56

1.56

*：SDM：TMP＝9：1 (同於TA-068W之配合比)

三、考 察

在野外，雞所發生之慢性呼吸器病，多半為複雜之混合感染例，有污染病原體之養雞場，導入雞群時，會急速擴大因這些病原體引起之污染，感染以至發病。再者飼養環境不良時，就連通常病原性弱之微生物，亦會感染而增加症狀惡化。因此，在發生複合感染型之呼吸器病之養雞場，非改正全進全出方式之導入或防疫計劃，期清淨化病原微生物不可。

就連IC，因很多是與其他病原微生物之混合感染例緣故，在IC之確實診斷上，HPg之分離同定，成為決定性手段。該供試雞群的發症雞，在試驗開始時，可見呈顏面腫脹，鼻汁排泄及異常呼吸音之IC特有症狀，自20例中之二例的眼窩下洞，分離出HPg。因此，可判斷該供試雞群為IC罹患雞。在IC之血清診斷上，有Sato及lritani之瓊脂膠內沉降反應等報告。本次，HPg A型為利用遵照Yamaguchi之方法，C型為遵照Sawata之方法製作之抗原，測定HI抗體價，沒有發現對C型之HI抗體價，對A型之HI抗體價有19.2％(120隻中有23隻)，診斷該供試雞感染HPg A型之IC。該供試雞群中，儘管無處置對照群有分離出HPg，但與投與群相較，有HI抗體價較低之傾向，此中理由有抗體產生機構或個體差等種種之要因，不能一概言之。又在該供試雞群，由於全例可見MG，MS及IBDV之各抗體，亦有典型之複合感染型之慢性呼吸器病罹患雞群。

本症之治療、預防，除應用疫苗外，從來就在應用各種之抗生素，抗菌劑。在日本，各種藥劑對HPg之感受性。有松井、清井，內田氏之報告。但近年亦有各種藥劑對HPg之耐性菌出現報告，對這種耐性菌，期待能開發有效之藥劑。一般，各種之磺胺劑及TMP，各別之單劑固然有優良之抗菌性，抗原蟲性，惟以適度比率配合時，有相乘的提高效果，以SDM及TMP配合之飼料添加劑(TA-068)，確認對IC有治療、預防效果。

因此，著者酒井氏等利用變更為可飲水投與劑型之水溶性製劑的TA-068W，探討對IC野外發生雞之效果及實用化的投與方法為目的，實施本實驗。對分離株之SDM、TMP及SDM／TMP之MIC，各別為25∼50，0.05∼0.10及0.39μg／ml，又OTC之MIC為1.56μg／ml，可見TMP及同TA-068W配合比之SDM／TMP，有較高之感受性。因此，確認TA-068W對HPg有高之抗菌活性。再者以TA-068W 0.3％以上之用量，飲水投與5 R時，由於減輕生存率、臨床症狀、降低體重推移及PHg分離率。比起對照之OTC製劑500 mg (力價)／l，5日投與。有同等或此以上之成績，所以可判斷本劑以0.3及0.5％投與5 R，有預防、治療IC之效果。

(譯自1988年4月號之「畜產之研究」)

飼料營養雜誌(14~22)

88年．第十二期─陳厚基

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