肉雞中草藥飼料添加劑
對小白鼠免疫試驗研究
摘要
國內貿易部無錫科學研究設計院承擔的試驗項目"肉雞複合中草藥飼料添加劑試驗研究"，已於1995年通過鑒定和驗收。研製成功肉雞中草藥添加劑及複合中草藥飼料添加劑，並形成批量生產能力。為試驗研究其防病抗病能力，和中國藥科大學合作進行了小白鼠免疫試驗，以觀察其對小白鼠免疫系統的影響，結果表明：
1. 本品5 MG／KG、2.5 MG／KG體重對小鼠的胸腺脾臟有顯著的免疫增強作用。
2. 本品10 MG／KG、5MG／KG、2.5 MG／KG體重對PC-DTH所致的接觸性皮炎有極顯著的免疫增強作用，增強率為53.6％、41.9％、42.6％。對正常小鼠血清的溶血素都有顯著增加，對小鼠血清的IgG(免疫球蛋白)含量有增加趨勢，對SRBC所致遲發型超敏反應有顯著的促進作用，促進率依次為44.29％、41.47％、43.35％，對小鼠免疫器官胸腺、脾臟重量有增加的趨勢，且差異顯著，對肝臟重量影響不大。由上實驗結果驗證，肉雞中草藥添加劑具有提高機體免疫能力。
關鍵詞：RZCYT(肉雞中草藥添加劑)、碳粒廓清、溶血素、免疫球蛋白(IgG)、PC─DTH(接觸性皮炎)、遲發型超敏反應。
1. 實驗材料
1.1：動物：選用昆明種小鼠、ICR小鼠，♂♀兼用。由中國藥科大學、南京藥物研究所動物房提供，ICR由南京醫學院實驗動物中心提供。
1.2：藥品與試劑：RZCYT(肉雞中草藥添加劑)由內貿部無錫科學院提供，要經過80目全部過篩方能使用，氫化潑尼松注射液來自上海第九製藥廠，2、4、6三硝基氯苯來自日本東京化成工業株式會社，綿羊細胞來自江蘇省江寧縣衛生防疫站，無菌保存在阿氏溶液中(4℃)，印度墨汁來自Schmid GmH+Co產品；免抗小鼠IgG血清，由南京軍區總醫院提供。
2. 方法及結果
2.1：RZCYT對小鼠體重、免疫器官重量的影響
昆明種小鼠，體重20±2g，隨機分組，ig給藥，連續給7天藥，末次給藥後24小時，眼眶放血處死小鼠，稱體重、胸腺、脾臟及肝臟重量，對小鼠胸腺、脾臟重量，結果表明RZCYT 10 mg／kg、5mg／kg、2.5mg／kg作用明顯增加，效果顯著，見表1。
表1. RZCYT對小鼠免疫器官重量的影響(X±SD)
| 藥物 | 鼠數 7天 |
劑量 (g／kg) |
體重 | 胸腺 | 免疫器官重量(mg／10g) | |
| 脾臟 | 肝臟 | |||||
| 對照組 pred rzcyt
|
13 13 11 12 9 |
10mg／kg 10×7 5×7 2.5×7 |
25.77±13.82*** 20.77±3.56 23.55±4.11 25.83±3.04 24.89±1.96 |
23.07±13.82*** 5.29±2.44 26.62±16.85** 34.35±12.85** 36.82±13.2 |
37.63±19.89*** 10.64±2.91** 43.55±11.55** 48.82±10.62** 46.84±9.5 |
480.3±106** 575.1±147 477.2±103 499.0±75 438.5±153 |
| **：P＜0.05，***：P＜0.01。Compared with control. Pred：氫化潑尼松。 |
||||||
2.2：RZCYT對小鼠碳粒廓清作用的影響
昆明種小鼠，體重20±2g，♂♀兼用，給藥如上，末次給藥24小時後，每鼠尾iv印度墨汁(1：2稀釋)0.1ml／10g，注入後2及15分鐘，分別從小鼠眼眶採血20ul放入2ml 0.1％NaHCO3溶液中，靜置1小時後，用721型分光光度計，在650nm波長處測光密度(OD)，並稱取小鼠肝臟、腺臟重量，計算廓清指數，K＝(㏒D1＝㏒D2)／(t1－t2)及吞噬指數，a＝體重／肝臟重。K，結果表明對K、a值都沒有影響(見表2)。
表2. RZCYT對小鼠碳粒廓清作用的影響(X±SD)
| 藥物 | 鼠數 | 劑量(g／kg.d) | 碳廓清指數 | 吞噬指數 |
| 對照組 Pred rzcyt
|
13 13 11 12 9 |
10 mg／kg.7天 10×7 5×7 2.5×7 |
0.034±0.012*** 0.019±0.009 0.026±0.007 0.029±0.008 0.042±0.011 |
6.397±1.71*** 4.509±0.968 5.852±1.098 5.737±1.153 5.832±2.041 |
| ***：P＜0.01，Compared with control. Pred：氫化潑尼松。 | ||||
3. RZCYT對小鼠血清抗體的影響
3.1：對溶血素抗體的影響
ICR小鼠，體重20±2g，隨機分組，給藥如上，給藥3天後，ip 20％(v／v)SRBC 0.2ml，末次給藥24小時後，眼眶採血，分離血清，血清稀釋度為1：333.3，取稀釋血清1 ml，加5％ SCRC 0.5ml及1：10稀釋為的豚鼠血清1ml，37℃，溫育20分，然後放入冰浴中終止反應，離心取上清液1ml，加都氏液3ml，混勻放置10分，540nm處測吸收度，另取0.25 ml 15％ SRBC，加都氏液3.75ml，同法測吸收度，作為srbc半數溶血吸收值。小鼠血清溶血素抗體含量以樣品半溶血值(Hc 50)表示，Hc50＝樣品的吸收值／SRBC半數溶血吸收值×稀釋倍數，實驗結果表明對小鼠Hc50有增加的趨勢(見表3)。
表3. RZCYT對小鼠血清溶血素抗體形成的影響(X±SD)
| 藥物 | 鼠數 | 劑量 | Hc50 |
| 對照組 CY rzcyt
|
13 13 12 11 11 |
20 mg／kg ip×4d(1,3,5,7) 10×3 5×3 2.5×3 |
227.22±11.11*** 15.90±8.74 231.02±12.96 231.69±4.56 237.68±17.19 |
| ***：P＜0.01，Compared with control. CY：環磷𣜭胺。 | |||
3.2：RZCYT對小鼠血清IgG含量的影響
ICR小鼠，體重20±2g，♂♀兼用，隨機分組，給藥如上，末次給藥24小時後，從眼眶採血，分離血清(鹽水1：3稀釋，免抗小鼠IgG抗血清稀釋度為1：10，按瓊指擴散法，以沉澱環的直徑(D)或面積表示IgG含量。實驗結果表明，RZCYT對正常小鼠血清免疫沉澱直徑(D)或面積有增大的趨勢(見表4)。
表4. RZCYT對小鼠IgG抗體含量的影響(X±SD)
| 藥物 | 鼠數 | 劑量 | 沉澱環直徑 | 沉澱環面積 |
| 對照組 CY rzcyt
|
13 13 12 11 11 |
20 mg／kg ip×4d 10×7 5×7 2.5×7 |
10.19±0.47*** 9.50±0.65 10.42±0.70 9.95±0.57 10.27±0.72 |
81.75±7.58*** 71.19±9.33 85.58±11.45 78.06±8.83 83.25±11.63 |
| ***：P＜0.01，Compared with control. CY：環磷𣜭胺。 | ||||
4. RZCYT對SRBC所致小鼠遲發型超敏反應的影響
昆明種小鼠，體重20±2g，♂♀兼用，隨機分組，每鼠右後足墊Sc 20％ Sc同樣量SRBC，左後足墊Sc同樣體積生理鹽水作對照，24小時以後測量小鼠左右後足墊的厚度差。實驗結果表明，RZCTY組有增大的趨勢(見表5)。
表5. RZCYT對小鼠SRBC所致DTH的影響(X±SD)
| 藥物 | 鼠數 | 劑量(g／kg.d) | 左右足墊厚度差 | 增強率％ |
| 對照組 Pred rzcyt
|
10 10 9 10 10 |
10 mg／kg×7.im 10×7 5×7 2.5×7 |
6.37±3.12*** 1.32±0.54** 9.16±4.38** 9.04±3.35 10.27±3.08 |
-384.1 43.35 41.47 44.29 |
| ***：P＜0.01，**：P＜0.05，Compared with control. Pred：氫化潑尼松。 | ||||
5. RZCYT對PC-DTH所致的接觸性皮炎(PC-DTH)〔4〕
將昆明種小鼠，剃去腹毛，塗1％PC─DTH的乙醇溶液100μl致敏，6天後用1％的PC橄欖油溶液30μl塗於右耳兩面進行攻擊，18─20小時後用千分尺測量左右耳厚度，將兩耳厚度的差作為DTH反應的強度。從PC致敏同時如上給藥第7天攻擊，第8天測量其結果表明RZCYT 10g／kg、5g／kg、2.5g／kg能非常顯著增加兩耳厚度差(見表6)。這也證明了RZCYT有非常顯著的細胞免疫增強作用。
表6. RZCYT對小鼠所致DTH的影響(X±SD)
| 藥物 | 鼠數 | 劑量(g／kg.d) | 左右耳厚度差(0.1mm) | 增強率％ |
| 對照組 Pred rzcyt
|
15 13 15 15 15 |
10 mg／kg×7d.im 10×7 5×7 2.5×7 |
41.80±14.2*** 14.60±5.90** 64.20±14.00** 59.30±4.50** 56.60±21.50 |
-65.15 53.60 41.90 42.60 |
| ***：P＜0.01，**：P＜0.05，Compared with control. Pred：氫化潑尼松。 參考文獻 ：略。 作者通訊地址：無錫市惠河路186號，郵編：214035。 |
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6. RZCYT的急性毒性試驗
取昆明種小鼠20隻，♂♀各半，體重20±2g，ig給藥42.86g／kg，飼養10d觀察結果，無異常及死亡。表明RZCTY實際無毒。由於本添加劑原料都是天然中草藥，無三致副作用，符合中國獸藥藥政及中草藥添加劑要求。
飼料營養雜誌(p.18∼23)─何武順.王永昌.丁家宜.李佩珍、九七年九期