田間分離之家禽艾美屬球蟲Eimeria

對不同劑型之沙利黴素(Salinomycin)

產品之敏感性試驗

        在現今世界各地，球蟲病仍是養雞業最大的困擾。因為雞隻飼養數量不斷增加，且球蟲易經由口腔感染，感染力很強，生活史又短，一旦爆發球蟲病對養雞業者將造成巨大損失，因此球蟲病的預防工作更顯重要。

前言

        目前養雞業者仍需使用抗球蟲藥來控制和預防家禽球蟲病。一般常用的抗球蟲藥物是攜帶離子型抗生素，這類球蟲藥不但能有效的控制球蟲病的發生，且能明顯提高肉雞的飼養效率。

        經過無數次抗球蟲藥的研究試驗後，在經歐盟允許使用的眾多離子型球蟲藥中，沙利黴素(Salinomycin)產品仍舊被認為是對艾美屬球蟲最有效的藥物。

        歐盟所准許使用的沙利黴素(Salinomycin)產品是以殺球(Sacox)為商品名的球蟲藥，並以其特有的配方及治療特性為基準。但是由於歐盟法令不甚周嚴，其他沙利黴素(Salinomycin)產品進入歐盟市場時，其品質、效率和安全性不須經過歐盟官方的檢驗。

藥物敏感性下降

        沙利黴素(Salinomycin)產品的優越功效在於其廣效性，同時由田間分離之各種球蟲對沙利黴素(Salinomycin)產品產生的抗藥性，較對其他的離子型球蟲藥所產生的抗藥性低。

        任何一種抗球蟲藥的敏感度下降時，將促使無症狀或亞急性的球蟲病發生。即使輕微的球蟲感染，也會降低消化率，進而影響飼料轉換效率，造成肉雞體重的下降。

        定期對球蟲做藥物的敏感測試是必要的，特別是在針對每種球蟲的控制時，能提供有價值的策略性資訊。

        此研究是在實驗室做藥物敏感性測試，目的是鑑定各種不同劑型的沙利黴素(Salinomycin)產品在效力上的差異。

球蟲藥效差異的檢定

        將1993年至1995年，由歐洲(31)、中美洲(3)、南美洲(30)、非洲(4)、美國(5)、泰國(1)等國家的74個肉雞場，在田間採樣之艾美屬球蟲鑑定及分離球蟲種類。

        以沙利黴素(Salinomycin)產品針對由田間普遍取得的單一混合型球蟲：E.acervulina、E.brunetti、E.mitis、E.maxima及E.tenella等五種球蟲進行藥物敏感性試驗(表一)。

表1. 由田間採樣分離之艾美屬球蟲種類

        由農場所取得的球蟲大多數是具感染性的，有些球蟲是由嚴重感染球蟲病的農場所得到的球蟲卵。這些農場，主要使用攜帶離子型或偶爾使用合成的球蟲藥做穿梭或輪換計畫，以預防球蟲病的發生。

        此藥物敏感性試驗中，以商用沙利黴素(Salinomycin)產品預拌劑之殺球(Sacox)及其他三種劑型之沙利黴素(Salinomycin)產品(A,B,C)，測試艾美屬球蟲對這些產品的藥物敏感反應。

        在試驗中共使用了3,552隻籠式飼養的商用龍門2日齡小公雞。雞隻飼養的溫度是30℃，相對濕度60％，每個籠子面積是984cm²，網狀籠底。以隨機採樣方式，在每個籠子裡放入4隻體重相同並以顏色記號區分的小雞。以任食方式給依德國DLG營養標準配製的肉雞飼料及飲水。

試驗方式

        將74個試驗組各再分為六測試小組，每測試組使用8隻小雞，每組試驗為期10天(人工感染球蟲前2天至感染後第7天)。

測試組分為：

        未感染，不投藥對照(UUC)；感染，不投藥對照(IUC)；及四組各含60ppm之不同劑型沙利黴素(Salinomycin)組，進行測試。

        飼料中之沙利黴素(Salinomycin)產品的正確濃度以濁度測定法分析，投藥組小雞在接受人工感染球蟲的前2天(D-2)就開始投與抗球蟲藥直至測試完畢(D+7)。在人工感染球蟲的當日(D+0)以確定的芽胞化卵囊量，經口腔感染小雞。依球蟲的種類及已預估之致病力…僅使感染未投藥組的小雞發生球蟲病症，但不致死之卵囊數，每隻小雞接種1萬至20萬個不等的卵囊。

        試驗終止時(D+7)，將試驗用小雞全數宰殺進行剖檢，分析抗球蟲藥的藥物效益，分析項目如下：

        ─從D-2至D+7小雞之增重。

        ─對照組與試驗組雞隻病灶值之差異。

        ─以Mc-Master法測定D+5，D+6及D+7天糞便中之卵囊數。

        以Mc Dougald et al(1986，1987)的方法，評估田間分離之球蟲對抗球蟲藥的反應。

        此試驗的統計是採用SAS(SAS Institute 1990)套裝軟體分析。彙整每一敏感試驗之測試數據做統計分析，並以小雞之增重、盲腸和十二指腸的病灶值及卵囊排放的數量等試驗數據，分析比較殺球(Sacox)和其他劑型之沙利黴素(Salinomycin)產品的有效性。

        在每一藥物敏感試驗中，計算殺球(Sacox)組及其他劑型的沙利黴素(Salinomycin)組之小雞增重的平均值之差異。

        各組之盲腸和十二指腸病灶平均值，皆經由敏感試驗測得。殺球(Sacox)和其他組之平均值的差異，由每試驗組中運算而得。依照Wilcoxon法評估每組的差異，並以殺球(Sacox)組的腸道病灶遞減值為相關測試目標。糞便卵囊密度的統計分析以試驗組之卵囊平均值做鑑定。殺球(Sacox)和其他劑型沙利黴素(Salinomycin)產品A、B及C的差異，經Friedman的雙重測試，每項目的統計依Holm(1979)順序淘汰法分析並以5％為顯著水準，比較處理間之差異。

試驗結果

1. 雞隻增重及腸道病變

        藥物敏感試驗之每一試驗組的平均體重見於圖1。

        受感染組的雞隻體重只達不受感染組之40％，這顯示罹患球蟲病的嚴重性。投與殺球(Sacox)的雞隻，其體重顯著(p＜0.05)較其他劑型沙利黴素(Salinomycin)產品A、B及C組為高。

        藥物敏感試驗中盲腸及十二指腸的病灶值列於表2及表3。

        在殺球(Sacox)組，其與球蟲病有關聯的腸道病變較不明顯，意即殺球(Sacox)在降低腸道的病變上的效果最為顯著。

        就十二指腸病灶值方面，已確認不同劑型之沙利黴素(Salinomycin)的明顯差異(見表2)。雞隻投與產品A(病灶值1.37)、產品B(病灶值1.27)、產品C(病灶值1.35)較投與殺球(Sacox)(病灶值1.16)的病灶值為高。

        此外，各測試產品在大腸病灶值亦有明顯差異(表3)。

表2. 十二指腸的病灶值分析表(平均值±標準偏差)

表3. 盲腸的病灶值分析表(平均值±標準偏差)

        在雞隻盲腸病灶值上，投與殺球(Sacox)(病灶值1.72)的雞隻比投與其他劑型沙利黴素(Salinomycin)產品A(病灶值1.96)、產品B(病灶值1.91)、產品C(病灶值1.90)要來的低。由此可見，殺球(Sacox)比其他劑型沙利黴素(Salinomycin)產品對於盲腸性艾美屬球蟲的感染，明顯有較良好的控制能力。

2. 藥物敏感性和抗藥性

        表4至表6為常見的艾美屬─單一種E.acervulina

        E.acervulina／E.tenella及E.acervulina／E.maxima／E.tenella等，對不同來源之沙利黴素(Salinomycin)產品的反應。

        對於E.acervulina的控制方面，殺球(Sacox)優於其他劑型之沙利黴素(Salinomycin)產品(表4)。

表4. 田間分離之E.acervulina(N＝21)對不同劑型之

沙利黴素(Salinomycin)產品的個別反應

        有10組(敏感度47.6％)由田間分離的E.acervulina球蟲對殺球(Sacox)敏感；在比較上，有8組(敏感度38.1％)由田間分離的E.acervulina球蟲對產品B敏感，6組(敏感度28.6％)對產品A敏感，及3組(敏感度14.3％)對產品C敏感。

        由田間分離之E.acervulina球蟲中，有三組(抗藥性14.3％)顯示對產品A有抗藥性，二組(抗藥性9.5％)對產品B及四組(抗藥性9.5％)對產品C有抗藥性。由田間分離之E.acervulina球蟲對殺球(Sacox)都無抗藥性。

        由田間分離之E.acervulina／E.tenella混合球蟲對沙利黴素(Salinomycin)產品的敏感性概列於表5。

表5. 田間分離之E.acervulina及E.tenella混合球蟲(N＝20)對

不同劑型之沙利黴素(Salinomycin)產品的個別反應

        由田間分離之E.acervulina球蟲，大部分對測試藥物都顯示具有敏感性，但殺球(Sacox)略佔優勢，只有投與產品C時才會發現抗藥性。

        當抗藥性產生時，許多球蟲藥物控制E.tenella球蟲的有效性的差異更加明顯。由田間分離之E.tenella球蟲品系中有13組(抗藥性65％)被列為對產品A有抗藥性球蟲；12組(抗藥性60％)對產品B有抗藥性及8組(抗藥性40％)對產品C有抗藥性球蟲。只有5組(抗藥性25％)由田間分離之E.tenella球蟲品系顯示對殺球(Sacox)有抗藥性。

3. 抗藥性作用的明顯差異

        沙利黴素(Salinomycin)產品對其他田間分離之混合性球蟲(E.acervulina／E.maxima／E.tenella)的測試效果列於表6。

表6. 田間分離之E.acervulina／E.maxima／E.tenella混合球蟲(N＝14)

對不同劑型之沙利黴素(Salinomycin)產品的個別反應

        E.acervulina球蟲品系的差異很明顯的表現於抗藥型式中。由田間分離之2組(抗藥性14.3％)球蟲對殺球(Sacox)具抗藥性。比較上，由田間分離之3組(抗藥性21.4％)球蟲對產品C及由田間分離之各4組(抗藥性28.6％)球蟲對產品A及產品C具抗藥性。

        田間分離之E.maxima球蟲品系全部對測試藥物皆具藥物感受性。

        在此試驗裡，E.tenella球蟲品系對藥物的抗藥性作用的明顯差異已被證實。由田間分離之8組(57.1％)E.tenella球蟲對產品C有抗藥性，6組(42.9％)對產品A有抗藥性，5組(35.7％)對殺球(Sacox)及3組(21.4％)對產品B有抗藥性。

        不同劑型之沙利黴素(Salinmycin)產品對探討田間分離之球蟲的蟲卵的增殖列於圖2。

        經感染由田間分離之球蟲的雞隻，投與殺球(Sacox)藥物後，球蟲卵囊的排放量最少。投與產品A及產品C和殺球(Sacox)組的雞隻，其卵囊的平均排放量具統計性顯著的差異(p＜0.05)。相對的，產品B組的雞隻的卵囊排放量並不比殺球(Sacox)組有顯著性較多的蟲卵。

結果的討論

        此研究結果證實，不同種沙利黴素(Salinomycin)產品對球蟲病的控制效果有差異。這些差異包括全部試驗所探討，且在多數情況下有意義的項目：體重、病灶值及卵囊的排放量。因為所有的試驗產品均含同一種有效成分，其對艾美屬品系的不同反應，應解釋為產品配方的差異所致。

        沙利黴素(Salinomycin)的生物活性是基於其與陽離子形成複合體。沙利黴素(Salinomycin)的分子緊緊圍繞著陽離子而發揮攜帶離子的作用。在運送陽離子進出細胞時破壞了寄生蟲細胞膜二側之離子濃度梯度，而使寄生蟲的細胞膜破裂。如果沙利黴素(Salinomycin)能輕易由賦形物中釋放，並均勻分佈在整個腸管內，才能完整的實現其效果。產品的有效成分是否能在腸管中均勻分佈和產品的組成有直接關係。其中最重要因素是顆粒大小的分佈、密度、顆粒的形狀及粘性等特點。以飼料添加劑的最佳顆粒尺寸為0.1至0.3mm。

        不同構造的產品造成高比率的粉塵(較細構造)，及／或使該添加劑無法理想的分布於飼料裡(較細或較粗構造)。沙利黴素(Salinomycin)在不同大小的顆粒裡的含量，也許會影響其效力。在粉塵大小的顆粒中，通常可以發現到較高的沙利黴素(Salinomycin)含量。此外，可想像得到的，但未證實，顆粒的大小及其穩定性，可影響其有效成分在腸管的降解率。

        超細結構產品提供較大的接觸面積，有利於更迅速的降解。然而，高效能、容易控制的商用產品本身的先決條件是沙利黴素(Salinomycin)的均勻分佈。

1. 顆粒的大小

        在此科技特性研究中所使用的產品的樣品批數顯示(表7)。

表7. 此試驗中使用之四種不同來源沙利黴素(Salinomycin)產品的若干性狀

        在殺蟲(Sacox)方面約有85％的顆粒存在於0.1及0.3mm的最佳尺寸範圍，且顆粒大小分佈均勻；所有顆粒顯示沙利黴素的成分約含12％，除了少量的粉塵部分含14.3％，此批產品A的測試樣品：在均勻度方面，其顆粒的分佈顯示並不在最佳範圍內；且沙利黴素在不同顆粒間含量0.8~10.7％。沙利黴素產品B：顆粒的均勻度約81％在最佳範圍內，其與有效成分含量有關的變異係數在不同的顆粒卻接近30％。相反的，產品C之每一粉末部分的沙利黴素含量的變異係數只顯示8.8％，但最佳範圍內的顆粒只有43.5％，明顯不足。

2. 預防抗藥性的產生

        從藥物敏感性試驗得到的結果，在增重及病灶值方面，可以斷定沙利黴素(Salinomycin)產品─殺球(Sacox)是最有效能的。沙利黴素(Salinomycin)產品A的表現或許如前面所述，其可測量的抗球蟲的活性，與其配方組成的性狀有關。產品B的表現超越產品A，可能是由於其適當大小顆粒的均勻分佈。產品B與殺球(Sacox)在效能上的差異，或許是因為產品B的不同顆粒當中，沙利黴素(Salinomycin)成分的變異較大。沙利黴素(Salinomycin)產品C和產品A的表現比例則很相近。

        為防止抗藥性的產生，在建議劑量下抗球蟲藥必須有高效能，且必須能阻止球蟲發展抗藥性及阻止球蟲在用藥期間存活下來。在這些試驗組裡，球蟲對沙利黴素(Salinomycin)產品A、B及C的藥物敏感度下降，是爆發嚴重球蟲感染的主要原因，其後果是體重明顯下降，造成很大的經濟損失。當我們選擇沙利黴素(Salinomycin)作為肉雞球蟲病的預防藥物時，這些因素都必須列入考慮。

        從以上的研究結論顯示，不同沙利黴素(Salinomycin)產品的抗球蟲效果有明顯的差異，尤其產品的科技特性，確實能影響測試藥物的效能。

飼料營養雜誌(p.68∼77)─天馨實業公司、九八年第四期