饲料鉴别与显微镜检查

饲料鉴别与显微镜检查

广义的饲料鉴别包括化学分析、动物试验，五官检验、显微镜检查等，利用各种手段评估饲料的营养价值良好与否，藉此确保饲料品质。

一、前言

一般言之，影响饲料品质最大者为饲料原料，因此饲料鉴别必须以单味饲料之鉴定检验为主要项目，此种单味饲料种类繁多并且需要注意检验对象饲料本身是否混杂异物或夹杂物。为达成此项目的检验人员必须具有(1)对各种原料饲料之认识判定能力，(2)具备相当熟练的检查技术及经验，以符合首先要进行的肉眼检查即五官感觉检验工作正确，更进一步需要利用显微镜作为肉眼检查的有利工具称之为镜检(Microscopic Analysis)。

二、采样与样品准备

此样品须能代表全部饲料之性状。

1.采样：

(1)散装卡车：使用抽样锥自每车5～10个不同角落处采样置於样品容器中混合之。

(2)袋装饲料：使用探针(Probe)自10％袋数的饲料逢机抽取置於样品容器中混合之。

(3)液体原料(Tank Car)：使用液体抽样器自罐槽车抽取约3公升样品。桶装液体原料自10％的桶数抽取样品混合之。

2.样品处理：

由每批中抽取的饲料样品混合搅拌均匀，使用四分法约采取500gm样品，分成两份，一供鉴定或分析，一供备查用。

以20号孔径之筛网过滤10～15gm之饲料，较粗之杂物即可以辨认，较细之杂物亦可以镜检辨认，若未经过滤，则连较粗杂物也检不出。因较粗杂物被正常较细成份所覆盖。

置10～30gm饲料於100×16mm试管，倒入2／3量之氯仿(CHCl₃)或四氯化碳(CCl₄)，充分振荡，静置2～3分钟，以牛角匙取出上层较轻之部份，於滤纸上等待乾燥始行镜检。小心倾出上层液体，其次取出沉淀於下层之物质於试管中，乾燥之後镜检。

三、设备

1.立体显微镜(Steroscopic Microscope)，具备适当照明附件，以8～50倍，观察饲料之外观，形态、颜色、颗粒大小等。

2.复式显微镜(Compound Microscope)，具备适当照明附件，其放大倍数为100～500倍，检查之前，饲料先以悬浮液(以水：氯化水醛：甘油＝1：1：1配成)处理，再观察细胞之形状，大小及排列，细胞壁及细胞内容物，淀粉粒之形状，植物纤维之大小及形状、颜色等等。矿物质及骨头之检查系观察其裂痕溶解度及结晶体之形态。

3.筛网：规格10、20、30、40、60、80、100 Mesh。

4.天平、垫板。

5.刷子、拭镜纸、滤纸、牛角匙。

6.乳钵及杵。

7.镊子探针、挟子。

8.对照成份(标准样品)。

9.培养皿、坩埚、载玻片、盖玻片。

10.化学药品(试药)。

四、鉴定步骤

检查鉴定方法除了利用显微镜检查之外尚需采用比重分离法、理化检查法即化学分析定性法等相互配合进行。

．饲料鉴别一般所采用顺序：

筛别饲料。

显微镜观察。

3.植物性原料行硷处理，水解去除可溶性成份後，残渣之植物组织以显微镜(较高倍率)观察其特性判定饲料原料。

4.动物性原料行酸处理使组织膨松後，以显微镜检查，亦由其特徵判定饲料原料。

5.有必要时采用比重分离法或流水选别法辅助鉴定工作。

．鉴定步骤．

┌夹杂物

│蒸制蹄角、皮革屑

┌─筛别－显微镜检查 ─┤家禽粪

│ │甲谷类

│ └乾血……等

│ ┌─硷处理－显微镜观察─┬植物性原料

│ │ └甲壳类

│ ┌┤ ┌羽毛粉

试料─┤ │└─酸处理－显微镜观察─┤肌肉类

│ │ └动物性原料

│ ├─脱脂－比重分离－沈淀物质─显微镜检查

└粉碎─┼─盐酸分离─┬溶解物－具壳、碳酸钙、卵壳等

│ └不溶解物－土砂

├─流水选别─┬稻壳、花生壳

│ └木屑等

│ ┌氨、尿素

└─理化学检查─┤淀粉、甲醛

└尿酸等

五、鉴定方法

饲料之鉴定由於鉴定项目的不同而有很多方法，例如某种单味饲料含有砂粒，很容易被肉眼所发现，而其究竟含砂粒多少百分率，则必须加以鉴定计算才能确知。此外，单味饲料组成成份是否标准亦应加以分析确知，以为选择原料之依据。

．单味饲料鉴定方法如下：

1.五官鉴定法

2.物理鉴定法

(1)简单器具使用鉴定法

(2)显微镜使用鉴定法

3.化学鉴定法

(1)定性鉴定法

(2)定量鉴定法

4.微生物鉴定法

5.动物试验鉴定法

1.五官鉴定法

以五种感觉器官为鉴定的器具，是一种最简单且最初步的检查方法。经验及熟练是最重要的检查先决条件，其正确性较难以数目字表示之。

(1)眼的鉴定

单味原料的形状、色泽、异物有否混入，有否长霉生？均可用肉眼鉴定。鉴定时。如供试品为白色，则置於黑纸上鉴定；如供试品为黑色则置於白纸上鉴定，其他色的供试品宜於白色纸上鉴定效果较好。鉴定时亦应注意光线的明暗，以期能对原料粒子之大小、色泽、形状等加以正确的鉴定。必要时加微量水以观察其色泽之变化。

(2)鼻的鉴定：

刺激性及腐败性之原料均可由鼻子来鉴定。臭味很强时，供试品很远即可被鼻子之鼻黏膜所感受出来。如判断困难时可加温水搅拌使其臭味散发而易被判定。

(3)口的鉴定：

供试品置於舌上来鉴定味之有无，刺激性味道之有无及砂粒之有无之判断。为避免有害物质对人体健康的影响，用口鉴定後，应用水漱口。

(4)耳的鉴定：

某些供试品，如乾燥良好则振动时发出金属音，反之水份高时则无金属音，或以饲料之掉落声来鉴定饲料的价值，此鉴定法之价值不大。

(5)触感的鉴定：

供试品置於手上，来鉴定比重的轻重，乾燥的良否及软便度等，并判定与正常饲料有否差异。同时亦可用手紧握来判定其水份含量的多寡。

2.物理鉴定法

(1)简单器具使用鉴定法

1.筛别鉴定法：

秤取20～50g试料利用直径0.5、1.2mm筛分别筛别後各别颗粒以5～20倍率显微镜观察之。此时需要检出夹杂物，镜检不易判定原料亦尽量以肉眼鉴定等其他方法辨别之，血粉、蒸制蹄角、角粉、皮革粉等不可能以镜检识别者应留待以後检验，不宜此时行之。

2.比重鉴定法

此种方法乃利用有机物与无机物之比重差距较大而行之，以定量饲料中所含矿物质量适用。

．饲料原料之比重，如表一

表一各种单味饲料之比重

原料

比重

原料

比重

原料

比重

植、动物性有机物

、虾壳、蟹壳

牡蛎壳、贝壳

大理石、碳酸钙

土砂

兽骨

1.5以下

1.4～2

1.9～2.6

2.6～2.9

1.8～2.5

1.9～2.2

尿素

二磷

蒸制蹄粉

陶土

大豆粉

脱脂糠类

1.3

2.3

1.31

1.87

1.38

1.39

棉籽粕

椰籽粕

芝麻粕

亚麻仁粕

木棉粕

菜籽粕

1.4～1.4

1.38～1.4

1.41

1.39～1.4

1.4～1.4

1.34

步骤：由表一选定适当比重溶液，装入简易分离漏斗(溶液装漏斗容量之半量)，并投入试料1～2g，搅拌再加溶液装满放置10分钟即行分离操作。定量矿物质通常采用比重2.1之比重溶液，沉淀物移置已知重量之滤纸，用酒精洗净後乾燥秤量之。沉淀物以显微镜检查其组成成份，沈淀物中经过5％盐酸溶液煮沸30分钟後之不溶物为土砂。

．比重溶液之调制：

所采用之比重溶液如表二，可采用二种溶液混合调制所需比重之溶液。

表二各种不同比重溶液

比重溶液

比重(15℃)

备注

苯 Benzene

氯仿 Chloroform

四氯化碳 CCl₄

溴仿 Bromoform

0.88

1.5

1.59

2.9

添加安定剂4％酒精者其比重为2.6

3.流水选别法：

稻壳粉末，花生壳粉末，木屑粉末等因纤维组织致密，经过硷处理後与其他植物质之比重差距较大，可采用流水选别法定量之。

步骤：精确秤量1～2g试料，采用四氯化碳溶液比重分离法去除矿物质後，置入於5％氢氧化钠溶液200ml煮沸30分钟，去除上澄液，残留物移置1公升容量的烧杯中，通入玻璃曲管(连接自来水管)放流自来水使其在烧杯中引起涡流，此时稻壳、花生壳、木屑等粉末集中於涡流中心部，其他重量较轻组织浮游於周围，即可以曲管吸取去除之。收集残渣置入乾燥滤纸过滤，风乾後於135℃乾燥2小时，称量残渣物重量。稻壳乘2.5，花生壳或木屑乘1.7(系数)即可获得其重量。残渣物供显微镜检验判别之。

4.放大镜鉴定法：

利用放大镜以鉴定供试品内之形状、粒度等，并与标准品比较其差异。

5.秤量器鉴定法：

谷类及其他浓厚饲料的容积比重大致一定。供试品可与标准品比较其容积比重，供试品如混有较重的物质，如土砂等即很容易的判定出来。

6.磁石鉴定法：

鱼粉或其他原料如混有针、铁钉等，禽畜摄取此等饲料即对消化器官有所伤害，故应防止。一般可以磁石(马蹄形)来鉴定其有否针，铁钉等并予检出。

(2)显微镜使用鉴定法

硷处理：

秤量2g试料置於500ml容量烧杯中，为防止黏着添加酒精湿润之。添加5％氢氧化钠溶液约200ml，煮沸30分钟，煮沸後加上水於溶液上部，静置後倒出上层悬浊液并避免沉淀物流失。取残渣沉淀物於玻璃薄片上，使薄层避免植物组织重叠，采用50～100倍率显微镜观察检查各层细胞组织形状、色调等。

2.酸处理：

秤量2g试料置於500ml容量烧杯中，添加5％硫酸溶液约200ml煮沸15分钟，以後与硷处理之操作同。

3.化学鉴定法：

化学方法的鉴定其正确性与显微镜相同，化学鉴定又分为定性分析与定量分析，於此仅就定性分析说明之。

(1)动、植物性的判定方法

混合饲料，其为动物性抑是植物性原料，以肉眼无法判定时，可以下述简单方法判定之。

1.烟的反应判定法：

供试品燃烧後，产生的烟以石蕊试纸试验，如呈酸性反应者为动物性，硷性反应者为植物性。

2.烟的味道判定法：

供试品燃烧後，呈燃烧毛之臭味者为动物性，否则为植物性。

3.酸、硷性的判定：

供试品置於10％氢氧化钠溶液煮沸之，如溶解者为动物性，不溶者为植物性。

(2)土砂的判定方法：

饲料中如品质管制较差，则常易为土砂所混入，而影响其品质及饲养价值。判定的方法为将供试品完全灰化後，以稀盐酸(三分水加一份浓盐酸)煮沸，如为不溶解物即为有土砂之存在。

(3)贝壳、石灰石粉末之判定方法

饲料中配合贝壳及石灰石粉末是需要的，但单味饲料如鱼粉混有贝壳、石灰石粉则不宜，用下述方法之判定很正确。即供试品中滴入少量稀盐酸，如发泡者则含有贝壳粉及石灰石粉，此因发泡者乃碳酸钙中之钙与氯结合为氯化钙与碳酸，而碳酸挥发出。

(4)锯屑、稻壳、花生壳之判定方法

锯屑、稻壳、花生壳其营养价值很低，往往被一些不肖的商人，掺杂於单味饲料中，应防止。其判定方法为将供试品少量置於培养皿中再添加苯二酚(Phloroglucin)溶液浸润後加2～3滴浓盐酸，如呈深红色即表示有掺杂，且加水後，此深红色部份即会浮上表面。

4.微生物学鉴定法

饲料制造方法及贮藏方法等之不当常会引起有害禽畜之霉菌，细菌之繁殖及有害的类，寄生等混入。如禽畜摄取此等饲料，则将会有不良的影响，如产卵量减低，且易感染疾病。

1960年在英国首先发现，饲料中生长的各种霉菌，能产生含有剧烈毒素的产物，曾经造成英国10万只火鸡死亡的〔X病〕被确认在饲料中含有毒性化合物，此即为目前所称之黄麴毒素(Aflatoxin)。

．黄麴毒素之检定方法现分述如下

(1)黄麴毒素的化学检定

1.黄麴毒素的抽出物：

根据Knake and Rao的快速定性方法(Knake and Rao, 1972)将100gm玉米样品加300ml溶剂(甲醇：水＝7：3)，以均质机经3,000rpm旋转3分钟，过滤後取滤液150ml加30ml甲苯，在分液漏斗中振荡30秒後，加200ml蒸馏水使乳化，分离上层甲苯抽出物。次添加10gm无水硫酸钠(Anhydrous Sodium Sulfate)及5gm绿色硷性碳酸铜(Green Basic Cupric Carbonate)去除玉米中色素，过滤蒸发至乾涸，溶於1ml甲醇而得黄麴毒素的粗抽出物。

2.黄麴毒素之定性：

利用薄层色层分析(Thin-Layer Chromatography, TLC)法以Wakogel B-5加适量蒸馏水，铺设於玻璃板上，风乾後在110℃下活化1.5小时，将前抽出物以微量吸管(M- icropipette)及取0.05ml点於TLC板上，以TEF溶媒系(Toluence：Ethylacetate：90％Fo- rmic Acid＝9：3：1)展开1小时风乾，在暗室中以364nm的黑射线(Black-Ray B-100 A)照射，与标准黄麴素对照下检出。

3.黄麴毒素B₁的定量：

经TLC法检定为阳性样品之黄麴毒素粗抽出物0.2ml点於TLC板，经TEF溶媒系展开後，收集在Rf＝0.31±0.02处的蓝色萤光点溶於定量的甲醇中，黄麴毒素B₁的定量计算乃以Beckman Dus-pectrophotometer在362nm波长下吸光度与已知浓度的黄麴毒素B₁比较而得。

(2)未知样品中黄麴毒素之检验法

1.将欲测样品磨碎。

2.秤取50gm装入500ml的三角瓶中。

3.加入70％丙酮水溶液250ml，塞上橡皮塞於臂氏振荡器中(或其他振荡装置)振荡30分钟。

4.用白磁漏斗(Buchner Filter)以Whatman # 1号滤纸过滤。

5.将滤液倒入400ml烧杯中。

6.加20％醋酸铅水溶液(Lead Acetate Aqu Solution)及60ml蒸馏水。

7.水浴锅中蒸发至约剩150ml。

8.加入少许Gelite後再以1号滤纸过滤。

9.滤液倒入500ml之分液漏斗中，加50ml氯仿(Chloroform)萃取之，连续萃取二次，将下层液注入250ml烧杯中。

10.蒸发至约剩5ml，加入一量匙100Mesh之矽酸(Silicic Acid)及少量氯仿。

11.用普通漏斗过滤，再以乙醚(Ether)洗涤滤渣三次(每次约50ml)，弃乙醚液。

12.留在滤纸上之滤渣再以5％的甲醇柭确氯芤?5％Methanol in Chloroform Sol-ution)洗涤二次(每次约50ml)将洗液装在烧杯中，蒸发至乾涸。

13.残渣以1ml之氯仿溶解後，用1μl的滴管点在矽胶(Silica gel Gtype 60)平板上，同时点上不同浓度之毒素标准液，置於展剂(苯：甲醇：醋酸＝90：5：5)中展开。

14.俟乾燥後置於365nm波长之紫外灯下观察之。

5.动物试验鉴定法

以上各种检查法均为间接的，如以动物试验则为直接的鉴定方法其效果较佳。但其所需的时间、经费等则较多。

一般动物试验方法有消化营养试验、代谢试验及有害物质试验等，其使用禽畜一般以天竺鼠及小白鼠较多。其详细方法请参阅有关营养学等书籍。

饲料营养杂志(72~79)

88年．第9期─郑长义

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